Бактеріологічне дослідження мокротиння дозволяє виявити збудників захворювань легенів. Гнійний, кров'янистий грудочку мокротиння розтирають між двома предметними скельцями. Висохлі мазки фіксують на вогні, потім один забарвлюють по Граму (див. Грама метод забарвлення), інший за Цілем - Нельсену. Забарвлення по Граму дозволяє виявити грампозитивні мікроби - капсульний пневмокок (рис. 17), стрептокок, стафілокок- грамнегативні - капсульна діплобацілла Фридлендера (рис. 18), паличка Пфейффера (рис. 19) та ін. Мікобактерії туберкульозу шукають в мазку, пофарбованому але Цілем - Нельсену. На мазок накладають шматочок фільтрувального паперу, рівний за площею мазку, наливають на нього фуксин Ціля (1 г основного фуксину розтирають у ступці з декількома краплями гліцерину, потім з 10 мл 96% спирту і доливають до 90 мл 5% розчину фенолу) і нагрівають на нежаркому полум'я до появи парів. Папірець скидають, мазок опускають в 5-10% розчин сірчаної кислоти (Або 3% розчин соляної кислоти в спирті) до знебарвлення, добре промивають водою, дофарбовують 20-30 сек. 0,5% розчином метиленового синього і промивають водою. Червоні мікобактерії добре видно (при імерсійної системі) на блакитному тлі препарату (рис. 20). У разі незнаходження мікобактерії туберкульозу в мазку вдаються до методу їх накопичення - флотації. 10-15 мл мокротиння поміщають в пляшку з похилими плічками ємністю 250 мл, додають подвійний об'єм 0,5% розчину їдкого натру і струшують до повного розчинення мокротиння. Додають 100 мл дистильованої води і 1 мл толуолу (Ксилолу, бензину), струшують 10- 15 хв., Доливають води до шийки і залишають на 1-2 години. Утворився зверху слівкообразний шар відсмоктують піпеткою з балончиком і наносять по краплях на підігріте скло, щоразу на попередню підсохнула краплю. Препарат фіксують і фарбують за Цілем - Нельсену. При негативному результаті вдаються до посіву мокротиння (бактеріологічне дослідження) або щепленні її тварині (біологічне дослідження). Посіви мокротиння використовують також для визначення чутливості її флори до антибіотиків.
Хімічне дослідження. Реакція мокротиння на лакмус, як правило, слабощелочная, кислої вона може стати при розкладанні М. і при примешивания шлункового вмісту (кисла відрижка, шлунково-бронхіальний свищ). Білок в М. відбувається із запального ексудату і з розпаду лейкоцитів. Його мало (сліди) в слизовій М., багато (1-2%) в М. при пневмонії, ще більше при набряку легені. Для його визначення до М. додають подвійну кількість 3% розчину оцтової кислоти, енергійно збовтують, фільтрують і у фільтраті визначають білок одним із звичайних способів (див. Сеча). Враховують трикратне розведення.
Бактеріоскопічне, бактеріологічне та біологічне дослідження. Вивчення мікробної флори мокротиння необхідно для уточнення діагнозу і для правильного вибору методу лікування. Цій меті служать бактериоскопическое, бактеріологічне та біологічне дослідження. Бактеріоскопічне дослідження досягає мети при відносно великому вмісті мікробів в М. Для приготування препаратів гнійний грудочку переносять на зовнішню третину предметного скла, накривають такою ж частиною іншого предметного скла і розтирають між ними. Мазкам дають висохнути, фіксують триразовим проведенням через полум'я газового пальника і забарвлюють, один за Грамом (див. Грама метод забарвлення), інший за Цілем - Нельсену (див. Туберкульоз, лабораторні дослідження). Забарвлення по Граму дозволяє виявити грампозитивний капсульний пневмокок, грамотрицательную капсульну пневмобаціллу Фридлендера, паличку Пфейфера (кольор. Рис. 5, 6 і 8), стафілокок, стрептокок, паличку Венсана, спірили, катаральний мікрокок та ін. При дослідженні відзначають кількість знайдених в поле зору бактерій (мало, помірно, багато) і переважання якого-небудь виду. Способом Циля - Нельсена забарвлюють кислототривкі мікроби, головним чином мікобактерії туберкульозу. Мікобактерії при цій забарвленням виходять червоного кольору і добре видно на блакитному тлі (кольор. Рис. 1).
Кілька більший відсоток мікобактерій туберкульозу виявляють за допомогою люмінесцентної мікроскопії (див.). Сяючі мікобактерії добре видно при дослідженні мазка з сухим об'єктивом Х40 при окулярі Хю. Мазки готують і фіксують, як завжди, потім заливають на 5-10 хв. розчином барвника (аурамін 1: 1000, акридин помаранчевий, суміш аурамін і родаміну), промивають водою, знебарвлюють 5 хв. солянокислим спиртом, знову промивають водою і обробляють
розчином кислого фуксину (кислий фуксин 1 г, оцтова кислота 1 мл, дистильована вода 500 мл) або метиленового синього, які гасять світіння фону. Препарат розглядають в ультрафіолетовому світлі (кольор. Рис. 2).
Для полегшення пошуків мікобактерій туберкульозу вдаються до методів накопичення, з яких найчастіше застосовують метод флотації. 10-15 мл мокротиння поміщають в ерленмейеровскую колбу або пляшку з похилими плічками ємністю 250 мл, додають рівний об'єм 0,5% розчину їдкого натру і струшують суміш до гомогенізації її. Додають 50 мл дистильованої води і 1 мл толуолу (ксилолу, бензину), струшують, знову додають воду до половини пляшки і струшують 10-15 хв., Потім доливають воду до шийки і залишають на 1-2 години. Утворений зверху слівкообразний шар відсмоктують піпеткою з балончиком, наносять на підігріте предметне скло, підсушують, фіксують і забарвлюють за Цілем - Нельсену.
Бактеріологічне дослідження застосовують для ідентифікації мікробів, визначення їх лікарської стійкості, вірулентності і т. Д. М. засівають на відповідні живильні середовища - щільні (кров'яний агар) або рідкі (цукровий бульйон, середовища Тароцці), напівсинтетичні середу Школьніковой- (кольор. Рис. 3 і 4). Виросли на відповідних поживних середовищах мікроби ідентифікують, визначають їх патогенність (у деяких випадках) і лікарську стійкість, попередньо визначають лікарську стійкість всієї флори М. в цілому. Це роблять шляхом посіву шматочків мокротиння, попередньо відмитих фізіологічним розчином, на поверхню кров'яного агару в чашці Петрі. На посів розкладають стандартні антибактеріальні паперові диски. Про чутливості флори судять за величиною зони затримки росту флори навколо диска. Потім проводять остаточне визначення стійкості кожного виділеного з М. виду бактерій окремо. Для цього 18-годинну бульйонну культуру кожного виду бактерій (стафілококи, стрептококи, клебсієли та ін.) Засівають газоном на чашки Петрі з кров'яним агаром. На газон розкладають стандартні паперові диски з антибіотиками, притискаючи їх пінцетом до поверхні агару так, щоб вони щільно торкалися до агару всією поверхнею. Чашки залишають при кімнатній температурі на 1,5-2 години-за цей час відбувається достатня дифузія препарату з дисків в навколишні агарові шари. Потім чашки Петрі поміщають в термостат при t ° 37 ° на 18-24 години. Про стійкість досліджуваного штаму судять по зоні затримки росту бактерій навколо дисків. При відсутності зони затримки штам вважають стійким. Якщо утворюється зона 1,5-2 см в діаметрі, штам вважають слабо чутливим, а при зоні більше 2 см - чутливим до даного антибіотика.
Про посіві мокротиння на мікобактерії туберкульозу см. Туберкульоз легень, дослідження мокротиння на мікобактерії туберкулеза- про визначення їх чутливості до антибіотиків см. Туберкульоз легень, лікарська стійкість мікобактерій.
При біологічному дослідженні М. заражають тварин. В якості діагностичного цей метод витісняється культуральними способами.