5850 авторів і 31 редактор відповіли на 28952 питання,
розмістивши 29771 посилання на 8900 сайтів, приєднуйтесь!

Забарвлення мікроорганізмів

РедагуватиУ обранеДрук

Забарвлення мікроорганізмів - найбільш поширений в мікробіології комплекс методів і прийомів, що застосовується для виявлення та ідентифікації мікроорганізмів за допомогою мікроскопа. У нативному (природному) стані бактерії мають такий же коефіцієнт заломлення, як і скло, тому вони невидимі при мікроскопічному дослідженні. Забарвлення мікроорганізмів дозволяє вивчити морфологічні особливості мікробів, а іноді точно визначити їх вигляд, наприклад некоториемікроби - однакові по морфології - різному забарвлюються за допомогою одних і тих же складних методів забарвлення. Забарвлення мікроорганізмів являє собою фізико-хімічний процес з'єднання хімічних компонентів клітини з фарбою. У ряді випадків різні частини мікробної клітини (ядро, цитоплазма) Вибірково забарвлюються різними барвниками. Найбільш придатними для фарбування мікроорганізмів є анілінові фарби, головним чином основні і нейтральні, кислі фарби менш придатні.

Приготування пофарбованого препарату включає ряд етапів: 1) приготування мазка- 2) висушування мазка- 3) фіксацію мазка- 4) окраску- 5) висушування.

Мазок готують на чистих предметних стеклах, на середину яких завдають невелику краплю води і в неї за допомогою бактеріологічної петлі поміщають досліджуваний матеріал. Матеріал розподіляють на склі рівномірним тонким шаром, розмір мазка -1-2 см2.

Препарат зазвичай висушують при кімнатній температурі на повітрі. Для прискорення висушування допускається підігрівання мазка в струмені теплого повітря високо над полум'ям пальника.

Висушена мазок піддається фіксації, при якій мазок прикріплюється до скла (фіксується), а мікроби стають більш сприйнятливими до фарбування. Способів фіксації багато. Найбільш простий і розповсюджений - фіксація жаром - нагрівання на полум'я пальника (препарат проводять кілька разів через найбільш гарячу частину полум'я пальника). У ряді випадків вдаються до фіксації рідинами (етиловий або метиловий спирт, ацетон, суміш рівних обсягів спирту та ефіру - По Никифорову). Після фіксації мазок фарбують. Кількість фарби, що наноситься на препарат, має бути таким, щоб покрити всю поверхню мазка. Після закінчення терміну фарбування (2-5 хв.) Фарбу зливають і препарат промивають водою.

Існують прості, складні і диференціальні способи фарбування мікробів. При простій забарвленні зазвичай вживають одну фарбу, найчастіше червону - фуксин, або синю - метиленовий синій. Фуксин фарбує швидше (1-2 хв.), Метиленовий синій - повільніше (3-5 хв.). Фуксин готують у вигляді концентрованого карболового розчину (фуксин Ціля), дуже стійкого і придатного для фарбування протягом багатьох місяців. Метиленовий синій готується заздалегідь в насиченому спиртовому розчині, який стійкий і може довго зберігатися.

Складні способи забарвлення, при яких застосовуються два або більше барвника, є цінними методами, використовуваними в мікробіологічної діагностики інфекційних хвороб.



Найбільше практичне значення має забарвлення по Граму (див. Грома метод забарвлення) і забарвлення за Цілем.

Метод забарвлення за Цілем є основним для фарбування кислотостійких бактерій. Тут застосовуються два барвника: карболовий фуксин Ціля і метиленовий синій. Кислотостійкі бактерії забарвлюються в червоний колір, все некіслотоустойчівие форми - в синій.

Метод Беніньетті є одним із способів забарвлення джгутиків. Протрава і забарвлення одним з фарбувальних розчинів, що складаються ex tempore (у міру потреби): I - сульфат цинку - 1 г, танін - 10 г, дистильована вода - 100 мл і II - насичений спиртовий розчин генціанвіолета. Змішують 5 мл розчину I і 3 мл розчину II, наносять на препарат, нагрівають до появи парів, промивають водою, висушують і розглядають.

З інших складних методів застосовується так званий негативний спосіб Бурри (див. Бурри метод), спосіб Гінса для виявлення капсул (див. Гінса метод) та ряд інших. Див. Також Бактеріологічне дослідження.



Забарвлення мікроорганізмів - комплекс методів вивчення структури і морфології мікроорганізмів при мікроскопії препаратів, приготованих з чистих культур або досліджуваного матеріалу. Забарвлення мікроорганізмів - важливий діагностичний прийом, що дозволяє встановити морфологічні особливості мікроба, а також розрізнити морфологічно ідентичні мікроорганізми, які по-різному фарбуються при використанні одних і тих же методів забарвлення.

Забарвлення мікроорганізмів - складний фізико-хімічний процес, механізм якого в деталях ще не вивчений. В основі забарвлення мікроорганізмів лежить взаємодія окремих структур бактерії з барвником. Отже, результат О. м. Залежить від хімічного і фізичного будівлі мікробів, властивостей барвника, способу приготування препарату і методу обробки їм мікроба. Для О. м. Використовують основні, кислі і нейтральні барвники. У основних барвників забарвлює початком служить катіон, а аніон бесцветен- у кислих, навпаки, барвна частина молекули є аніоном. Утворені при дисоціації основних барвників катіони з'єднуються зі структурами бактерій, що володіють кислими властивостями-звільняються аніони кислих барвників з'єднуються зі структурами мікроорганізму, що мають основні властивості.

У звичайних середовищах бактерії мають негативний поверхневий заряд, в їх цитоплазмі і ядрі є з'єднання кислої природи. Тому основні барвники, у яких барвна частина молекули заряджена позитивно, володіють великим спорідненістю до бактерії і частіше застосовуються в мікробіології, ніж кислі барвники, які зазвичай використовуються для контрастного фарбування фону препарату. У нейтральних барвників фарбувальними є і катіони, і аніони (фарба Романовського - Гімзи).

Фіксовані бактерії забарвлюються краще живих, так як клітинна стінка і цитоплазматична мембрана живої клітини обмежують проникнення в неї барвника. Для вітальної забарвлення мікроорганізмів (забарвлення живих мікроорганізмів) барвники застосовують у великих розведеннях (1:10 000- 1: 100 000), щоб уникнути артефактів, що з'являються в результаті токсичної дії барвника на живі мікроорганізми. Найчастіше для вітальної О. м. Користуються метиленовим сіпім, нейтральним червоним та ін. Препарати для мікроскопії готують методом роздавленої краплі. (Див.) Або висячої краплі (див.).

Найбільш поширені методи О. м. В фіксованих препаратах. Ці методи підрозділяють на прості і складні. При простих методах застосовують один барвник (наприклад, забарвлення метиленовим синім, фуксином Пфейфера та ін.). При складних методах застосовують кілька барвників і дослідження включає кілька етапів фізичної і хімічної обробки препарату (див. Грама метод забарвлення, забарвлення за Цілем - Нельсену - див. Туберкулез- забарвлення по. Романовським - Гімзою - див. Кров та ін.). Складні методи забарвлення мікроорганізмів використовують у мікробіологічній діагностиці для вивчення будови і функцій мікроорганізмів. Наприклад, за допомогою фарбування по Граму диференціюють грампозитивні мікроби від грамнегативних, що має велике значення для ідентифікації гонококів, менінгококів, кишкових бактерій та ін. Методом Ціля - Нельсена- користуються для діагностики туберкульозу і прокази, методом Ненесера - дифтерії.

Як приклад використання забарвлення мікроорганізмів для вивчення будови і функцій мікроорганізмів можна вказати на застосування йоду для виявлення крохмалю, вікторії синьою - для виборчої забарвлення клітинної стінки і цітоплазматііческой мембрани бактерій, осмієвою кислоти - для фарбування жиру і т. Д. Ці методи засновані на відмінностях в хімічному будову окремих морфологічних структур мікроба, вибірково офарблюваних різними барвниками.

Інші методи забарвлення окремих структур мікроорганізмів засновані на здатності цих структур по-різному фіксувати барвники, що виявляється при подальшій обробці препарату спиртом, кислотою, ацетоном та ін. І докрашіваніі контрастним барвником. Так, для виявлення спор використовують їх властивість міцно фіксувати барвник і не знебарвлюватися при подальшій обробці кислотою. При фарбуванні бактерій за Грамом основними барвниками (генціановий фіолетовий та ін.) З наступною обробкою йодом в одних мікроорганізмах (грампозитивні) барвник міцно фіксується і не видаляється при обробці спиртом або ацетоном- грамнегативні ж бактерії легко знебарвлюються. Для виявлення в бактеріях нуклеоида застосовують метод Фейльгена. Від забарвлення у власному розумінні слід відрізняти імпрегнацію солями металів, наприклад імпрегнацію солями срібла при фарбуванні спирохет за методом Левадіті (див. Сифіліс).

Крім позитивних методів забарвлення (барвник безпосередньо діє на офарблює субстрат), в мікробіології використовують і негативні методи - фарбування фону препарату. Вони застосовуються у разі, коли мікроби або їх окремі структури погано фарбуються. Класичним прикладом негативного забарвлення є Бурри метод (див.). У тих випадках, коли необхідно виявити у мікроорганізму капсулу і пофарбувати сам мікроб, негативні та позитивні методи комбінують (див. Гінса метод).

Існує також кілька способів підвищення ефективності забарвлення. Одні з них створюють умови для проникнення барвника всередину окрашиваемого об'єкта (наприклад, при фарбуванні суперечка препарати попередньо обробляють соляною кислотою). Інші методи, пов'язані із застосуванням протрав, призводять до збільшення окрашиваемого об'єкта [наприклад, застосування солей таніновою кислоти для фарбування джгутиків у бактерій (див. Беніньетті метод), тілець Пашена - за методом Морозова і клітинної стінки - по методу Нейза].

Див. Також Бактеріологічна техніка, Бактеріологічне дослідження.



РедагуватиУ обранеДрук


Увага, тільки СЬОГОДНІ!
» » Забарвлення мікроорганізмів