Методи об'єктивної оцінки стану системи згортання крові набувають все більш широке поширення. Існуючі сьогодні інструментальні методи дослідження гемостазу можна розділити на дві основні групи: 1) механічні та механо-електричні і 2) кондуктометрические.
До першої групи належать тромбоеластографи- прилади, засновані на методі тромбоеластографії, вперше запропонованому Хартертом і згодом описаний ним у ряді робіт [38, 39].
До групи кондуктометричних приладів відноситься коагулограф Н-333.
З появою перших тромбоеластографія виникла можливість в значній мірі виключити суб'єктивні помилки, властиві більшості широко поширених методів, що характеризують стан системи згортання крові (час згортання по Лі-Уайту, протромбіновий активність, толерантність плазми до гепарину та ін.). Сучасні тромбоеластографія дозволяють графічно реєструвати процес згортання крові аж до фібринолізу, досліджувати порушення фибриновой структури при захворюваннях, що супроводжуються порушенням згортання і антісвертивающей систем крові, здійснювати контроль при лікуванні хворих антикоагулянтами.
Метод тромбоеластографії заснований на графічній реєстрації змін фібрин-тромбоцитарной структури проби крові чи плазми, які розміщені в кювету приладу. Кювета, в якій знаходиться кров (або плазма), термостатовому і здійснює обертальні зворотно-поступальні рухи. В кювету, не торкаючись її, опущений циліндр, закріплений на тонкої сталевої нитки. У тромбоеластографія, по Хартерту, на нитки укріплено дзеркало, на яке падає промінь світла, що відхиляється на відстань, відповідне куту повороту циліндра.
На тромбоеластограмме (рис. 120) розрізняють першу фазу згортання - утворення тромбопластину, що позначається як час реакції або R. Час реакції відображає ферментативну фазу згортання до появи перших ознак опору кров'яного згустку. Час реакції на тромбоеластограмме вимірюється відрізком від початку запису до її розширення до I мм. До отриманого значення додають час наповнення кювети (n).
Рис. 120. Схема розшифровки тромбоеластограмми. Пояснення в тексті.
Друга фаза - утворення тромбіну, відповідає швидкості, з якою йде утворення ниток фібрину (організація згустку) - її позначають символом К, на тромбоеластограмме вона визначається відстанню від розширення кривої в 1 мм до її розширення до 20 мм.
Третя фаза, обумовлена максимальної еластичністю (щільністю) згустку (Ма), характеризується найбільшою амплітудою запису.
За формулою E = 100 · ma / 100-ma розраховують величину Е, яка характеризує функціональну здатність тромбоцитів, кількість і якість фібриногену. Кількість фібриногену в сироватці впливає на максимальну еластичність, тому при зменшенні її одночасно з подовженням часу реакції R знижується і максимальна еластичність.
При проведенні досліджень за допомогою тромбоеластографія необхідно враховувати час, що минув з моменту взяття крові до початку запису, яке повинно бути завжди однаковим для отримання порівнянних результатів.
Чотириканальний тромбоеластографія Тромб-1 (30] має 4 автономних каналу запису і дозволяє отримувати об'єктивну інформацію про перебіг процесу згортання цільної крові або цитратной плазми [15, 17].
Технічні характеристики приладу Тромб-1: об'єм крові чи плазми, необхідний для дослідження, - 0,36 мл. Запис тромбоеластограмми проводиться чорнильно-пишучим самописцем на діаграмної папері шириною 100 мм, зі швидкістю руху стрічки 10 мм / год. Температура проб крові підтримується безконтактним напівпровідниковим терморегулятором на рівні 37 ± 1 ° і контролюється по ртутному термометру. На приладі можна одночасно записувати результати дослідження 1,2 і 4 проб крові чи плазми або 2 проб з паралельним записом.
Прилад живиться від мережі змінного струму напругою 220 В. Споживана потужність-120 Вт Габаритні розміри - 540 X 295 X 350 мм. Маса - 20 кг.
В даний час випускається більш досконалий тромбоеластографія Тромб-2 (Рис. 121). Він дозволяє одночасно записувати від однієї до чотирьох проб крові чи плазми, причому обсяг досліджуваних проб при записі на 1 і 3 каналах становить 0,36 мл, а на 2 і 4 каналах 0,1 мл, що дозволяє використовувати кров, отриману проколом м'якоті пальця . Початкова ділянка тромбоеластограмми може бути зареєстрований з триразовим збільшенням, що підвищує точність визначення початку процесу згортання.
Рис. 121. тромбоеластографія Тромб-2.
На кондуктометричну принципі побудований коагулограф Н-333, позитивно зарекомендував себе при дослідженні системи згортання крові, а також ряду інших показників [24, 26, 29].
Прилад автоматично реєструє початок і кінець процесу згортання крові, швидкість згортання, щільність згустку, початок ретракции і фібринолізу, швидкість його.
Л. Ф. Коблов і співавтори [16] підкреслюють, що ретракция кров'яного згустку, будучи завершальною фазою згортання, залежить від ряду факторів, у тому числі, в значній мірі, від кількості та функціональної активності тромбоцитів, вказуючи на можливість застосування коагулографа саме для цих цілей. Коагулограф може бути також використаний для дослідження швидкості реакції осідання еритроцитів у динаміці, визначення кількості фібриногену, величини гематокриту [4, 5, 6, 25, 28, 29].
Для дослідження може бути використана кров венозна і капілярна, отримана проколом м'якоті пальця.
Принцип дії приладу заснований на реєстрації зміни електропровідності крові. Досліджуваний зразок крові (0,28 мл) поміщається в осередок приладу, виготовлену з фторопласту (несмачіваемих пластмаса). Осередок розрахована так, що забезпечує точну дозу без необхідності застосування мірної піпетки. Після заповнення осередок поміщається в повітряний термостат коагулографа, в якому автоматично підтримується температура 37 ± 0,5 °. Спеціальне переганяє пристрій, що приводиться в рух електродвигуном, надає осередку коливальні рухи, так що кров поперемінно замикає і розмикає електроди, запресовані в дні комірки. Поступово, у міру згортання, переміщення крові по дну осередку утруднюється, вона стікає з електродів повільніше і тому вони розмикаються менш повно. Коли процес згортання крові закінчиться, припиниться розмикання електродів.
Товщина шару над електродами при хитанні осередку буде змінюватися в залежності від щільності згустку, і це призведе до зміни електропровідності.
При ретракції згустку і фібринолізі виділяється сироватка почне переміщатися по комірці, і це також призведе до зміни опору. Результати цих процесів записуються на діаграмної стрічці самописця, як послідовні імпульси з частотою 6 хитань на хвилину, а амплітуда хитань відповідає електропровідності крові, що замикає електроди осередки. До тих пір, поки кров не згорнулася, на діаграмної стрічці реєструється більша амплітуда імпульсів. У міру згортання крові амплітуда імпульсів зменшується. Коагулограма здорової людини наведена на рис. 122.
Рис. 122. Коагулограмма здорової людини (тривалість одного імпульсу-10 с). Швидкість руху стрічки-10 мм / хв.
Т, - початок згортання крові-Т2 - кінець згортання крові: Т3 - тривалість процесу свертиванія- Арф- час початку реєстрації фібріноліза- Ам - максимальна амплітуда (відповідає значенню гематокриту) - AО - мінімальна амплітуда.
Рис. 123. Коагулограф Н-333.
Портативність коагулографа (зовнішній вигляд приладу наведено на рис. 123), автоматична реєстрація процесу, простота експлуатації дозволяють використовувати прилад в широкій мережі лікарень і поліклінік, а також науково-дослідних інститутів.
Технічні характеристики коагулографа Н-333: габарити приладу - 135x250x171 мм-маса - 6 кг. Живлення від мережі змінного струму - 220 В, 50 Гц, споживана потужність - не більше 20 Вт.
Оцінка згортання властивостей крові може бути проведена і без реєстрації тромбоеластограмми за допомогою тромбоеластометра ТЕМ-1 (рис. 124).
Рис. 124. Тромбоеластометр «ТЕМ-1».
Тромбоеластометр реєструє два найбільш важливих параметри процесу згортання крові: час реакції і площа тромбоеластограмми, підраховують протягом 15 хв після закінчення часу реакції. Остаточний результат дослідження автоматично реєструється на двох лічильниках [18].
Для визначення протромбінового і тромбопластин про в о г о часу зручний шведський прилад CU-500 [48]. В основу принципу визначення часу утворення згустку покладено метод Квик, але процес визначення автоматизований, що підвищує точність методу, за рахунок виключення суб'єктивних помилок.
CU-500 являє собою фотоелектричний прилад з вбудованим суховоздушная термостатом з температурою 37 ± 0,5 °, що вміщає 12 реакційних осередків. Після інкубації в термостаті при додаванні хлориду кальцію відбувається синхронне автоматичне включення фотоелектричної системи вимірювання оптичної щільності і електронного секундоміра. На певному рівні оптичної щільності електронний секундомір відключається і результати фіксуються на цифровому табло, з точністю до десятих часток секунди.
До приладу додається набір високочистих реактивів і автоматична піпетка зі знімними наконечниками з несмачіваемих матеріалу одноразового користування. Реактиви та плазма відмірюють автоматичною піпеткою. Протромбіновий час вимірюється з точністю ± 0,5 с. Тромбопластиновий час-з точністю ± 0,2 с. Прилад підключається до мережі змінного струму напругою 127/220 В, 50 Гц. Споживана потужність - 20 Вт. Маса -4,1 кг. Габарити - 330Х185Х147 мм.