Метод розділення сумішей речовин, заснований на їх відмінностях у розподілі між двома фазами, називається хроматографією. Зазвичай одну з фаз закріплюють, т. Е. Мають рухливу і нерухому фази.
М. С. Кольором був розроблений метод і введений термін «хроматографія».
Хроматографія на папері [10, 64] (або паперова хроматографія) застосовується для розділення і аналізу сумішей низькомолекулярних речовин: амінокислот, «невеликих» пептидів, Сахаров, нуклеотидів, алкалоїдів, вітамінів, антибіотиків і т. Д. В даний час у зв'язку з низкою недоліків паперу (неоднорідність структури і значні розміри мікрокапілярів, труднощі очищення і т. д.) паперова хроматографія активно витісняється тонкошарової хроматографією і тому буде описана тут вельми стисло.
Техніка хроматографії на папері вельми проста і зводиться до нанесення проб, проведення поділу, висушування хроматограмм і їх обробці для виявлення та ідентифікації розділилися речовин. Апаратурнеоформлення хроматографії на папері досить примітивно.
При нанесенні проб істотне значення має розмір стартовою зони, так як чим він менше, тим краще поділ і вище роздільна здатність методу. Проби зазвичай наносять у вигляді плям на сухий папір. Для запобігання распливанія плями в процесі його нанесення бажано, по-перше, випускати рідину на папір по можливості повільно і, по-друге, сушити пляма в процесі його нанесення. Для дозування наносяться проб часто користуються попередньо відкаліброваними автоматичними мікропіпетку. Нанесення проб є найбільш трудомісткою операцією при паперової хроматографії.
Поділ зазвичай проводять у скляних судинах для хроматографії, що випускаються вітчизняною промисловістю, а за їх відсутності в будь-яких відповідних круглих або прямокутних високих скляних банках з притертими кришками або пришліфованою верхнім краєм для забезпечення герметичності. Застосування низхідній хроматографії вимагає приміщення всередину банки спеціальної скляній або металевій підставки, несучої випускаються промисловістю скляні човники з елюіруют середовищем, в яку опущений край паперу.
Проведення висхідній хроматографії простіше, тому що не вимагає підставок з човниками. При цьому елюіруют розчин може бути налитий тонким шаром на дно банки, а папір скріплена у вигляді циліндра і поставлена в нього.
Хроматограми сушать в залежності від характеру поділюваних речовин в сушильній шафі з вентиляцією при температурі 60-120 ° або у витяжній шафі в струмі повітря.
Ідентифікацію речовин на хроматограмах часто роблять на підставі вимірювання величини Rf, що представляє собою відношення відстаней, пройдених на хроматограмі відповідно даним речовиною і фронтом розчинника. Величина Rf є константою для даної речовини лише в точно стандартних умовах проведення досвіду і навіть при одній і тій же системі розчинників може залежати від сорту паперу, температури, обсягу проби і її чистоти, ступеня насичення водою, способу подачі розчинника, відстані між стартовою лінією і джерелом розчинника та інших причин. Існують різні пристосування для швидкого визначення величин Rf на хроматограмах. Простий у виготовленні прозорий трикутник з оргскла (рис. 109), при користуванні яким вершина А поєднується зі стартовим плямою, після чого обертанням навколо Л трикутник розташовується таким чином, щоб сторона ВС проходила через точку перетину перпендикуляра, опущеного з стартового плями на лінію фронту розчинника , з самою лінією фронту розчинника.
Рис. 109. Трикутник для швидкого визначення Rf на хроматограмах. Пояснення в тексті.
Тонкошарова хроматографія [2, 64, 88] являє собою метод розділення і аналізу речовин в тонкому шарі пористого матеріалу, зазвичай 0,1-1,0 мм завтовшки, нанесеного на скляну пластинку. Застосовуються пластинки розмірами до 20Х 20 см. Перевагами тонкошарової хроматографії перед паперовою є застосування більш дрібнодисперсних, ніж папір, матеріалів, що забезпечує більш високу роздільну здатність методу, а отже, використання більш коротких шляхів міграції речовин і скорочення часу поділу. Залежно від нанесеного на платівку речовини можливі тонкослойная, розподільна, адсорбційна, іонообмінна та гель-хроматографія, а також їх комбінації. При використанні паперу основну роль грає розподільна хроматографія. Методика проведення тонкошарової хроматографії вельми проста. Вона складається з тих же основних етапів, що й паперова хроматографія.
Відмінності методики тонкошарової хроматографії від паперової полягають в тому, що при нанесенні проб для проведення тонкошарової хроматографії зазвичай не застосовують дуття повітря для висушування плям. Поділ можна виробляти в менших і більш компактних судинах. Замість вирізання плям для елюції застосовується їх соскабливание з платівки. Для цього може бути використано просте пристрій, що є з'єднану з водоструминним насосом трубочку із загнутим і відтягнутим кінчиком і впаяним посередині скляним фільтром.