Преципитация - це серологічна реакція, що полягає у взаємодії розчинної антигену з антитілом з подальшим випаданням дрібнозернистого осаду (преципітату).
Реакція преципітації дозволяє визначити в досліджуваному матеріалі присутність невідомого антігенапутем додавання відомого антитіла або за допомогою відомого антигену - невідоме антитіло. Преципитация йде гірше за відсутності солей. Оптимум преципитации знаходиться в діапазоні рН = 7,0-7,4.
Механізм преципитации близький до механізму аглютинації. Під впливом імунної сироватки, прореагованою з антигеном, зменшується ступінь його дисперсності. Необхідно, щоб сироватка і антиген були абсолютно прозорі. При постановці преципитации можна до одного розведення сироватки додавати різні розведення антигену або навпаки.
Преципитация реєструється краще, якщо антиген нашаровувати в пробірці на антитіло. При цьому спостерігається поява преципітату у вигляді кільця - кольцепреціпітаціі. Кольцепреціпітаціі проводять у спеціальних пробірках діаметром 2,5-3,5 мм. Для визначення числа антигенів в досліджуваному матеріалі або різних антитіл в сироватці користуються реакцією преципітації в агарі: 1% освітлений агар розливають в чашки Петрі або на предметні скла. У різні лунки, зроблені в агарі, наливають розчини антигену і антитіла, які дифундують назустріч один одному, утворюючи лінії преципітації. Реакція преципітації широко використовується при діагностиці сибірської виразки (Див. Асколі реакція).
Преципитация в агарі дозволяє визначати токсигенность дифтерійних культур.
У судово-медичних дослідженнях преципітація служить для встановлення видової приналежності крові, органів і тканин за допомогою специфічних преципитирующих сироваток.
Преципитация - реакція осадження комплексу антигену (преципітиногену) і антитіла (преціпітіни). Преципитация - один з імунологічних феноменів, що дозволяють визначити вміст антитіл (див.) В сироватці крові хворих або вакцинованих людей, а також у крові імунізованих тварин. При використанні стандартних сироваток реакція преципітації може бути застосована для титрування різних за походженням розчинних антигенів (див.).
При найбільш простій формі постановки реакції преципітації до ряду пробірок з постійною кількістю антигену додають подслаіваніем досліджувану сироватку в серії кратних розведень. Після 30-60 хв. інкубації при кімнатній температурі на межі двох рідин утворюється кільце помутніння - кольцепреціпітаціі. Мінімальна кількість сироватки, яке дає реакцію П., приймають за титр антисироватки. При зворотній постановці реакції зі стандартною антисироваткою вдається оцінити відносну концентрацію антигену в різних біологічних рідинах.
Результати титрування антитіл і антигенів на підставі вищевказаного методу не мають абсолютного кількісного вираження. З метою кількісної оцінки вмісту антитіл Гельдербергер, Кабат (М. Heidelberger, Е. Kabat) та ін. Розробили кількісний метод реакції преципітації, в основі якого лежить виявлення так звані зони еквівалентності. При змішуванні вікових кількостей антигену з постійними обсягами антисироватки кількість утворюється преципитата спочатку зростає, а потім знову знижується через збільшення розчинності комплексу антиген - антитіло в надлишку антигену. Якщо визначити у всіх пробірках вміст антитіл в надосадової рідини, то виявиться, що в середніх пробірках ряду або навіть в єдиній пробірці антитіл в надосадової рідини ні- разом з тим тут же утворюється найбільший за величиною преципитат. Оскільки в зоні еквівалентності в преципитат втягується також весь антиген, введений в суміш реагуючих речовин, після вирахування з кількості білка преципитата білка антигену отримують точну величину вмісту антитіл в даному обсязі досліджуваної сироватки. Вміст білка преципитата після ретельного промивання охолодженим физиол. розчином визначають по азоту або яким-небудь колориметричним методом.
При оцінці значення реакції преципітації як діагностичного методу необхідно враховувати, що в імунних сироватках можуть бути присутніми антитіла, що не володіють властивостями преципітинів і, отже, не утворюють преципитата при взаємодії з антигеном. До їх числа належать насамперед неповні антитіла, а також деякі інші антитіла, які відносяться до групи гамма-А-глобулінів.
Здатність антисироватки преципітувати антиген може бути порушена нагріванням до 65-70 °, обробкою органічними розчинниками, відновленням в кислому середовищі [Ізлікер (Н. Isliker), А.Я. Кульберг]. Феномен преципітації з антисироваткою, свідомо містить преціпітіни, можливий лише при певній температурі, концентрації солей і водневих іонів. Найшвидше реакція П. протікає при 25-37 °. Неодмінна умова освіти преципитата - присутність в изотонических концентраціях хлориду натрію (0,85% розчину NaCl). При збільшенні концентрації NaCl до 15% преципітати, утворені антигеном полисахаридной природи, частково розчиняються, чим можна скористатися для вилучення чистих антитіл. Реакція преципітації з антигенами білкової природи протікає з однаковою швидкістю і повнотою як в 0,85%, так і в 15% розчинах NaCl. Оптимальна для утворення преципітату концентрація водневих іонів відповідає значенням рН від 5,0 до 9,0.
У лабораторній практиці знаходять застосування різні модифікації реакції преципітації. Зокрема, реакцію термопреципітації застосовують для виявлення антигенів бактерій сибірської виразки, ботулізму та ін., Що не піддаються термічній денатурації (коктоантігени). Ця реакція відрізняється від реакції кольцепреціпітаціі тільки тим, що в якості антигену використовують фільтрат прокипяченного досліджуваного матеріалу (див. А сколи реакція).
При аналізі за допомогою реакції преципітації складної суміші антигенів неможливо охарактеризувати властивості окремих компонентів суміші. Для вирішення цього завдання вдаються до методів преципітації в агарі і до іммуноелектрофореза. Метод преципітації в агарі в найбільш поширеною модифікації Оухтерлоні (О. Ouchterlony) заснував на тому, що антиген і антисироватка, диффундируя назустріч один одному в тонкому шарі агару, утворюють при зустрічі лінії П. За кількістю таких ліній можна судити про кількість компонентів, що містяться в даної суміші антигенів. Метод Оухгерлоню дозволяє порівнювати різні антигенні суміші і визначати ступінь споріднення присутніх у них компонентів. При аналізі складної антигенної суміші, що містить речовини з однаковими швидкостями дифузії в агарі, велику допомогу може принести метод іммуноелектрофореза. Суміш антигенів попередньо поділяють в електричному полі в платівці агару, після чого проявляють окремі компоненти антисироваткою. Антисироватку вносять в ровик, пророблений в агарі паралельно лінії, вздовж якої переміщалися при електрофорезі антигени. Кожен з антигенів дає з антисироваткою індивідуальну дугу П. Іммуноелектрофорез широко застосовують для аналізу патологічних відхилень у білках сироваток, а також при імунологічному аналізі тканинних і бактеріальних антигенів.
Преципитация в судово-медичному відношенні. Преципитация застосовується в судовій медицині для встановлення видової приналежності крові, частин органів і тканин. У ряді слідчих справ потрібно встановити видову приналежність крові, виявленої на знаряддях вчинення злочину, одязі злочинця чи жертви та ін. Для реакції преципітації застосовують преципитирующие сироватки, одержувані імунізацією кролів, птахів, кіз білками різних тварин. Зазвичай виготовляють сироватки, преципитирующие білок людини, коня, кішки, курки, свині, собаки, рогатої худоби. Вони повинні володіти титром не нижче 1:10 000 і бути досить специфічними. З досліджуваного плями або скоринки крові готують витяжки на физиол. розчині, які потім випробовують преципитирующими сироватками. Вид білка вважається встановленим, якщо одна з преципитирующих сироваток утворює преципитат з витяжкою з досліджуваної крові при відповідній контрольній реакції. Реакцією преципітації можна встановити також вид білка тканин і органів людини або тварин. Зазвичай реакцію преципітації виробляють в пробірках з конусоподібним кінцем. При отриманні митних витяжок реакцію преципітації виробляють в агарі по Оухтерлоні.