Визначення гемоглобіну здійснюється методами концентраційної колориметрії. Одним з найпростіших колориметрів є візуальний гемометр типу ГС-3 по Салі, до цього часу найбільш поширений в мережі лабораторій країни. В основі визначення гемоглобіну лежить метод розведення. Солянокислий гематин, що утворюється при змішуванні крові з розчином соляної кислоти, розбавляється в градуйованою пробірці до збігу кольору розчину з кольором стандартів гемометра. Кількість гемоглобіну відраховується за рівнем розведеного розчину і по розподілам градуйованою пробірки.
Деякі практичні відомості, які треба враховувати при роботі з гемометра типу Салі [27].
1. Рідинні кольорові стандарти з часом слабшають, що призводить при роботі з ними до завищення результатів. Цього можна уникнути, якщо проводити обов'язкову періодичну перевірку гемометра.
2. Не можна застосовувати пробірки від одного гемометра для роботи на іншому гемометра. У кожному гемометра градуированная пробірка і зупинено кольорові стандарти підібрані таким чином, що відстань між відмітками пробірок і стандартів одного комплекту однаково. Це означає, що їх внутрішні діаметри також рівні. Рівність внутрішніх діаметрів пробірки і стандартів є неодмінною умовою для правильності показань гемометра.
3. Необхідно суворо дотримуватися час від моменту розведення до відліку, оскільки забарвлення гематина не стабільна в часі. При роботі з гемометра ГС-3 цей час одно 5 хв. Помилка визначення навіть при дотриманні всіх рекомендованих умов може становити ± 10% [27].
Вицвітання забарвлення стандартного розчину, використовуваного в гемометра Салі, робить їх непридатними для науково-дослідних робіт і змушує з великою обережністю застосовувати у медичній практиці [8]. Більш точними є методи фотоколориметрії і спектрофотометрії, докладно описані в гл. 3.
При розробці і випуску гемоглобінометр однією з найважливіших проблем є стандартизація показань приладів. Як і всі вимірювальні засоби, гемоглобінометри треба градуювати при випуску і перевіряти правильність їх показань при експлуатації. До недавнього часу фотоелектричні гемоглобінометри градуйованим по оксигемоглобіном, який, як виявилося, давав завищення на 5 і більше відсотків [27].
В останні роки в багатьох країнах в якості стандартного прийнятий ціанметгемоглобіновий (геміглобінціанідним) фотометричний метод градуювання гемоглобінометр [40], головне достоїнство якого полягає у високій стабільності розчину гемиглобинцианида. Піддані спеціальній обробці і запаяні в пробірках, ампулах або флаконах, ці стандарти довго зберігаються незмінними. Вони можуть бути переслані в будь-яке місце країни і по них легко зробити перевірку гемоглобінометр і провести відповідну корекцію приладу.
Цей метод прийнятий в якості стандартного Міжнародним комітетом з стандартизації в гематології при Європейському товаристві гематологів. Однак реактив, що застосовується для визначення (трансформування) гемоглобіну крові, містить ціанистий калій в кількості 50 мг на літр (реактив Драпкіна). Мається рішення про введення в нашій країні геміглобінціанідним методу визначення гемоглобіну, але замість токсичного ціаністого калію в ньому застосовується менш токсичний і більш доступний ацетонціангідрін, з розрахунку 0,5 мл ацетонциангидріна на 1 л розчину. Принципової різниці заміна реактивів не викликає, тому що кінцевий продукт - гемиглобинцианида - в обох випадках один і той же.
Всі гемоглобінометри, які градуйовані по якомусь іншому методу, повинні бути вивірені по геміглобінціанідним (ацетонціангідріновому) методу. Зазвичай це робиться шляхом паралельного визначення вмісту гемоглобіну в пробі ацетонціанідним методом із застосуванням спектрофотометра і на наявному приладі. Зазвичай перевіряють не менше трьох точок. Вихідними даними є отримані на спектрофотометрі.
У СРСР розроблений гемоглобінометр фотоелектричний ГФ-3, який забезпечений скляною циліндричної зливний кюветой. Як звичайно, необхідна кількість крові для аналізу - 0,02 мл, загальний обсяг проби - 5 мл.
Певні зручності представляють портативні фотоелектричні гемоглобінометри. До таких приладів можуть бути віднесені «Гемотест», що випускається в Данії, прилади фірми «Ларі Льюнгберг» (Швеція), ЕЕЛ (Англія) та ін. У цих гемоглобінометр результат аналізу зчитується зі шкали приладу, отградуированного в г% гемоглобіну.
Одним з таких приладів є Гемолюкс АМ-101 [32]. Живлення приладу здійснюється від батареї. Маса приладу, разом з харчуванням - 0,5 кг (рис. 129). Підготовлений в пробірках розчин гемоглобіну крові засмоктується в кювету шляхом натискання кнопки, і так само за допомогою кнопки виштовхується з кювети. Під час дослідження усмоктувальна трубка почергово занурюється в пробірки з підготовленими пробами. Результати аналізу зчитуються з цифрового табло в г%. Габаритні розміри приладу - 172X63X47 мм. Заряд однієї батареї розрахований на 3000 вимірювань.
Рис. 129. гемоглобінометр «Гемо-люкс AM-101».