Сперма являє собою суміш секрету чоловічих статевих залоз - яєчок і їх придатків, сім'яних пухирців, простати і сім'явивідних шляхів. У випадках зґвалтування, мужолозтва, розпусних дій сперма може бути виявлена на тілі та одязі потерпілих, оточуючих предметах, а також на тілі та одязі злочинця.
Велике значення для встановлення факту статевих зносин надається виявленню сперми в піхву потерпілої, а при вчиненні статевого акту в збоченій формі, а також при мужолозтво - у вмісті прямої кишки потерпілої чи потерпілого. Тому мазки, взяті з піхви, служать важливими речовими доказами. Їх слід брати якомога швидше, оскільки сперма, як правило, зберігається недовго. Для цієї мети в піхву вводять стерильний марлевий тампон, після чого вміст тампона переносять на предметні скла, які потім і досліджуються.
Як правило, при сім'явиверганні у чоловіків виділяється близько 4-5 мл сперми, рідко - дуже незначна кількість (0,5-0,2 мл) (олігоспермія). Можуть зустрічатися патологічні стани сперми: некроспермія (відсутній рухливість сперматозоїдів) і азооспермія (сперматозоїди взагалі відсутні).
Висохлі плями сперми зазвичай більш щільний на дотик, ніж навколишні ділянки тканини. Колір їх залежно від матеріалу предмета-носія може бути від світлого до сірувато-жовтого і навіть коричневого. При огляді в ультрафіолетових променях сліди сперми світяться голубувато-білим кольором. При виявленні слідів, схожих на сперму, слідчий чинить так само, як і зі слідами крові: предмети зі слідами вилучають, сліди описують, вживають заходів до їх збереження, упаковують і направляють для дослідження в судово-медичну лабораторію.
Встановлення наявності сперми в плямах проводиться за допомогою ряду попередніх і доказових методів дослідження. Попередні методи дослідження - дослідження в ультрафіолетових променях (плями насінної рідини світяться голубувато-білим кольором), мікрокристалічні реакції, реакція з картопляним соком, реакція на кислу фосфатазу - недостатньо специфічні і дозволяють лише запідозрити насіннєве походження плями.
Основним доказовим методом є морфологічний, в основі якого лежить виявлення в досліджуваному плямі сперматозоїдів. З тканини, на якій знаходиться підозріле пляма, вирізають ниточку або шматочок, разволокнівают і фарбують еритрозином, фуксином. Препарат досліджують під мікроскопом. Виявлення хоча б одного сперматозоїда свідчить про те, що пляма залишено насіннєвий рідиною. Негативні результати морфологічного дослідження сперматозоїдів в мазках можуть іноді залежати від часткового руйнування їх мікрофлорою піхви. При дослідженні плям сперми такий результат може пояснюватися руйнуванням сперматозоїдів під впливом різних факторів зовнішнього середовища - хімічних, термічних і ін. Або азооспермией. При невиявлених сперматозоїдів в досліджуваному плямі морфологічним методом використовують інші методи - ферментний метод виявлення специфічного для насіннєвий плазми ферменту лактатдегідрогенази (ЛДГ), метод виявлення особливих білків - холіну і сперміну, характерних тільки для сперми. Ферментний метод дозволяє виявляти плями сперми лише незначною давності. В даний час розробляються методи, що дозволяють виявляти в плямі сперми окремі білкові фракції, властиві тільки спермі. В експертну практику такі методи поки не впроваджені. Є також методи, що дозволяють встановлювати походження плям від сперми на підставі виявлення притаманних їй мікроелементів (емісійно-спектральні дослідження).
Довівши насіннєве походження плями, переходять до визначення групової приналежності сперми по системі АВ0 (Н). Антигени цієї системи в спермі знаходяться у великій кількості і виражені, сильно. Визначення групової приналежності сперми в плямі є обов'язковим для вирішення питання про можливість її походження від певного конкретної особи. Таке дослідження проводиться з урахуванням категорії виделітельства - встановлення, до якої з двох основних категорій за змістом антигенів у виділеннях відноситься проходить у справі чоловік - до виделітелей або невиделітелям.
Категорія виделітельства зазвичай встановлюється по слині, в якій визначаються антигени системи АВ0 (Н). Для цього випробуваному пропонують прополоскати рот водою, а потім вже збирають слину в пробірку - 3,5 мл. Слину центрифугируют, рідку частину виливають на марлю, яку потім висушують і направляють в якості зразка в судово-медичну лабораторію. У цьому зразку експерт і визначає антигени системи АВ0 (Н). Необхідно при цьому враховувати, що вираженість групових антигенів одного і того ж особи в різних його виділеннях може бути неоднаковою, у зв'язку з чим в розпорядження експерта в подібних випадках необхідно також направляти, крім зразків слини, зразки сперми.
Якщо група крові обвинуваченого, що є невиделітелем, збігається з групою сперми в плямі, робиться висновок про походження сперми від іншого чоловіка. При збігу групи крові чоловіка-виделітелей з групою сперми в плямі при вирішенні питання про можливість походження сперми в плямі від даного чоловіка обов'язково враховується сила виразності групових антигенів. Якщо сила виразності групових антигенів системи АВ0 (Н) у зразку сперми обвинуваченого значно поступається такої в досліджуваному плямі сперми, робиться висновок про походження сперми від іншої особи. При зворотному співвідношенні вираженості групових антигенів (висока їх активність у зразку сперми і низька в слідах сперми на речових доказах) не можна виключати можливість походження сперми від обвинуваченого, так як ослаблення сили вираженості групових антигенів може бути наслідком впливу різних зовнішніх факторів.
Нерідко сліди сперми на речових доказах виявляються змішаними з іншими виділеннями організму або кров'ю людини. У таких випадках встановлення групової приналежності сперми вельми скрутно, оскільки у всіх цих виділеннях і в крові можуть міститися власні групові антигени системи АВ0 (Н).
Для цілей диференціації антигенів різного походження запропоновані методи, засновані на термічному фіксуванні групових антигенів крові у змішаних плямах і на подальшому виявленні антигенів, властивих тільки спермі. Для диференціації групових антигенів сперми і крові у змішаних плямах запропоновані й інші методи - виборче екстрагування таких плям деякими хімічними реагентами, що роблять можливим вихід у досліджувану витяжку або насіннєвих, або кров'яних антигенів системи АВ0 (Н), метод імунофлюоресценції та ін. В останні роки показана можливість виявлення в слідах сперми спадкових груп фосфоглюкомутази і фосфоглюконат-дегідрогенази та деяких інших ферментів.
При встановленні можливості походження сперми на речових доказах від певної особи в судово-медичну лабораторію направляють також зразки рідкої крові потерпілої і підозрюваного для визначення їх групи, зразки їх слини для встановлення категорії виделітельства.