Мікроскопія - зорове дослідження різних дрібних об'єктів (від 0,2 до 0,0000002 мм) за допомогою мікроскопа (із збільшенням від декількох десятків до сотень тисяч разів).
Звичайний світловий мікроскоп (див.) Використовується в тих випадках, коли структури об'єкта досить контрастні і добре помітні. Світлова мікроскопія дозволяє отримати збільшене і рухоме зображення, провести мікрофото- і кінозйомку, тривало спостерігати один і той же об'єкт. У тих випадках, коли об'єкти мікроскопії недостатньо контрастні, для їх вивчення застосовують спеціальні методи світлової мікроскопії.
1. Мікроскопія в темному полі (і її різновид - ультрамікроскопія) заснована на тому, що дрібні частки, що лежать за межами роздільної здатності мікроскопа, стають видимими в променях, що йдуть під таким великим кутом, що в об'єктив вони безпосередньо не потрапляють (потужний пучок бічного світла). В об'єктив потрапляє тільки світло, відбите від цих частинок-
при цьому вони виглядають світяться точками на темному тлі.
2. Фазово-контрастна мікроскопія дозволяє різко підвищити контрастність зображення об'єкта. Принцип методу полягає у виявленні зрушень фази світлових коливань, які виникають, коли світло проходить крізь структуру, що має показник заломлення, що відрізняється від показника заломлення навколишнього середовища. Фазові зрушення оком що безпосередньо не уловлюються, але в спеціальному фазово-контрастному мікроскопі структури, що мають більш високий показник заломлення (навіть абсолютно прозорі), виявляються більш темними (або більш світлими залежно від конструкції приладу), ніж навколишній фон.
Подібного роду картина спостерігається і при так званій амплітудно-контрастної або аноптрального мікроскопії.
3. Ультрафіолетова мікроскопія, заснована на здатності деяких речовин вибірково поглинати ультрафіолетові промені з певною довжиною хвилі, принципово майже нічим не відрізняється від звичайної світлової мікроскопії і здійснюється за допомогою мікроскопів з кварцовою або відбивної (дзеркальної) оптикою. Зображення розглядається на флюоресцируют екрані візуально, а також фотографується. Микроскопирование об'єктів дозволяє виявити досліджувані речовини, не застосовуючи фарбування.
4. Флюоресцентна (люмінесцентна) мікроскопія дозволяє вивчати як власну (первинну) флюоресценцію ряду речовин, так і вторинну флюоресценцію, викликану фарбуванням клітинних структур спеціальними барвниками - флюорохромами. Принцип методу полягає в тому, що деякі речовини при світловому опроміненні починають світитися самі. Для порушення флюоресценції у видимій частині спектру зазвичай користуються синім світлом або ультрафіолетовими променями.
Багато речовин, що не флюоресцирующие у видимій області (особливо нуклеїнові кислоти), При освітленні ультрафіолетовим промінням починають флюоресціровать і можуть виявлятися без застосування флюорохромів. До вторинної флюоресценції відноситься імунофлюоресценція, заснована на взаємодії імунного білка з флюорохромами. Див. Також Мікроскоп, Мікроскопічна техніка.
Мікроскопія (від грец. Mikros - малий і skopeo - розглядаю, досліджую) - метод зорового дослідження дрібних об'єктів при збільшеннях від декількох десятків до сотень тисяч разів. Для сучасної мікроскопії доступні практично всі тіла розмірами від 0,2 до 0,0000002 мм. Розрізняють світлову і електронну М. Світлова мікроскопія забезпечує корисне збільшення до 2-3 тис. разів, кольорове і рухоме зображення живого об'єкта - можливість мікрокінозйомок і тривалого спостереження одного і того ж об'єкта, оцінку його динаміки і хімізму. Вона незамінна в діагностичних і дослідницьких роботах, повсякденно необхідна в практичній медицині.
Електронна мікроскопія (див.) Дозволяє працювати при збільшеннях до багатьох сотень тисяч разів, але тільки з висушеними, убитими або нежізнедеятельнимі об'єктами. Її наукове значення виключно велике, застосування ж у практичних, у тому числі діагностичних, цілях можливо, але поки не розроблено. Загальним як у світловий, так і електронної мікроскопії залишається опис форм по збільшеному зображенню об'єкта і зіставлення форм з різними функціональними, хімічними та іншими властивостями.
Роздільна здатність і контраст - Основні характеристики будь-якого мікроскопа. Роздільна здатність кількісно виражається мінімальним відстанню, на якому знаходяться дві точки, демонстровані мікроскопом роздільно (мінімальне разрешаемое відстань, або дозвіл). Дозвіл людського ока в режимі найкращого бачення дорівнює 0,2 мм. Зображення двох точок, розташованих одна до іншої ближче 0,2 мм, зливаються, і неозброєний очей виявляє замість двох точок якусь іншу фігуру (зображення геометрично не відповідає реальному об'єкту). Така ж помилка виникає в будь-якому оптичному приладі, що будує недозволене зображення. Побачити недозволений об'єкт можна тільки за умови, що він світиться значно яскравіше, ніж фон (типовий приклад недозволеного зображення - зірки на нічному небі). Такий об'єкт незалежно від його реальної форми виглядає як яскрава крапка. Для недозволеного об'єкта будь-яке збільшення є марним, оскільки ні за яких умов його реальна форма і деталі не можуть бути зображені і розглянуті. Дозвіл світлового мікроскопа досягає 0,0002 мм. Отже, за його допомогою можна досягти корисного збільшення в 1000-2000 разів. Найбільш досвідчені мікроскопісти, застосовуючи найкращі засоби підвищення контрасту, отримують хороші мікрофотографії при збільшеннях порядку 3000- 4000 разів. Цим і вичерпуються можливості корисного збільшення світлового мікроскопа.
Контраст зображення визначається різницею яркостей фону і зображення. Якщо яскравості розрізняються менше ніж на 3-4%, їх відмінність не може бути уловлено ні оком, ні фотопластінкой- зображення залишиться невидимим, навіть якщо мікроскоп дозволяє його деталі. Контраст залежить як від властивостей об'єкта, що змінюють світловий потік у порівнянні з фоном, так і від здатності оптики вловити виникають розбіжності у властивості променя.
Природні межі можливостей світлового мікроскопа обумовлені хвильової природою світла. Конструкції сучасних мікроскопів відпрацьовані настільки добре, що верхні межі їх технічних можливостей майже збігаються з цими природними, фізичними кордонами. Існують, однак, досить численні фактори, які погіршують режим роботи мікроскопа і знижують науково-практичну цінність отриманих результатів. Більшість з цих факторів контролюється знаннями та вмінням мікроскопісти. Дотримання правил мікроскопічної техніки (див.) Обов'язково для кваліфікованої роботи, т. Е. Для наближення реальних результатів микроскопирования до розрахункових можливостям даного приладу.
- Види світлової мікроскопії