Приставки для вимірювання флуоресценції до спектрального колориметри «Спекол» (ГДР) можуть працювати від ртутної лампи і від лампи розжарювання. Випромінювання збудження флуоресценції виділяється інтерференційними фільтрами в ультрафіолетовій ділянці спектра, а дифракційної гратами - у видимому.
Мається приставка для прямокутної кювети об'ємом 1,5 мл і приставка для циліндричної кювети (пробірки) діаметром 16 мм для обсягу близько 5 мл або більше.
Флуоресценція під кутом 90 ° сприймається фотоелементом, перед яким вставляються змінні вторинні світлофільтри. При дослідженнях флуоресценції підключається додатковий підсилювач постійного струму, який посилює фототок в 106 разів.
Реєструючий прилад - мікроамперметр, шкала якого градуйована по пропущенню 0-100% і по оптичної щільності від 2 до 0. Еталоном служить стандарт з флуоресціюючого скла або розчин хініну відомої концентрації. Чутливість приладу в режимі флуориметрії 1 · 10-8 г / мл хініну відхиляє стрілку мікроамперметра на 10 поділок.
Висока чутливість флуоресцентного аналізу привертає дослідників багатьох спеціальностей, в тому числі медиків і біологів, оскільки досліджувані ними речовини присутні в нанограммових кількостях (10-9 г) і менше, і ці речовини треба не тільки виявити, але й кількісно оцінити. За останні два десятиліття було розроблено значну кількість флуориметра, які з плином часу піддалися удосконаленню в напрямку підвищення чутливості, точності і стабільності.
У представленій вище табл. 12 наведені основні параметри флуориметра, розроблених і випущених за період з 1955 по 1970 р
Згідно авторам огляду кращими за конструкцією флуориметра є двоканальні прилади з компенсацією, модуляцією світлового потоку, з реєстрацією за нуль-індикатору і з одним приймачем випромінювання.
Подальше удосконалення флуориметра повинно бути спрямоване на введення мікрокювет, зливних і проточних кювет для збільшення продуктивності приладу, оснащення приладів термостатом, криостате.
Так само, як розвиток абсорбціометріческого аналізу привело до створення сучасних спектрофотометрів, розвиток і поглиблення флуоріметріческого аналізу привело до створення Спектрофлуориметр.
При розробці приладів стало ясно, що для зняття спектра збудження вже недостатньо ртутної лампи, яка дає кілька окремих ліній. Потрібен був прилад, що дозволяє порушувати флуоресценцію монохроматичним світлом будь-якої довжини хвилі як у видимій, так і в ультрафіолетовій області (т. Е. Діапазоні 200-800 нм). Спектрофлуориметр дозволяє реєструвати випромінюється флуоресценцію в настільки ж широкої області для отримання спектрів збудження і флуоресценції.
За кордоном багато уваги приділяється розробці Спектрофлуориметр, як правило, призначених для проведення наукових досліджень при вивченні будови речовин.
Для пояснення взаємозв'язку окремих частин Спектрофлуориметр на рис. 87 зображена блок-схема приладу. Блок живлення 1 забезпечує харчуванням елементи схеми. Випромінювання джерела порушення 2 (найчастіше ксенонової лампи в кварцовому балоні) потрапляє на перший монохроматор 3, що виділяє монохроматичне випромінювання, яке в свою чергу надходить на досліджувану речовину 4. Що виникає випромінювання флуоресценції, пройшовши другий монохроматор 5, сприймається приймачем випромінювання 6 і після підсилювача 7 надходить на вимірювач або реєстратор 8.
Рис. 87. Блок-схема Спектрофлуориметр.
Пояснення в тексті.
Слід, однак, відзначити, що на звичайному, нескорректированной Спектрофлуориметр одержувані спектри в значній мірі спотворені, що виражається у відсутності пропорційності при записі окремих ділянок спектра. Це викликано насамперед особливостями спектральної характеристики фотоумножителя, чутливість якого за діапазоном неоднорідна і має форму випуклої кривої. Певною мірою нерівномірність записи спектра залежить від призменного монохроматора, оскільки розкриття щілини по ходу запису змінюється.
Для отримання істинного спектра флуоресценції, який би міг бути використаний для порівняння та ідентифікації речовин, дослідникам доводиться вдаватися до корекції отриманих спектрів. Творці приладів вносять в їх конструкції відповідні удосконалення, що дозволяють вести автоматичну корекцію спектра, що є досить складним завданням.