ПЛР - це метод лабораторної діагностики, спрямований на виявлення збудників інфекційних захворювань. Трибуквений варіант - це абревіатура назви "полімеразна ланцюгова реакція". Власне, в цій назві і відображається суть методу, але для того, щоб розібратися, доведеться грунтовно згадати шкільний курс біології.
Але спочатку - трохи історії. Метод ПЛР був розроблений в 1983 році Кері Мюлліса, за що він був удостоєний Нобелівської премії. Спочатку метод використовувався в основному для наукових цілей, але потім, розгледівши його перспективність і ефективність, метод стали просувати в практичну медицину.
У літературі дуже часто зустрічається таке образне опис ПЛР: це метод, за допомогою якого вчені можуть знаходити голку в стозі сіна і потім будувати стіг з цих голок. В принципі, дуже точний опис. Якщо продовжувати порівняння, то голка - це невелика ділянка генетичного матеріалу мікроорганізму, а стіг сіна - це організм людини, в якому даний мікроорганізм оселився.
Принцип роботи
За генетичну інформацію в живому організмі будь-якого розміру відповідає ДНК - двухспіральная дезоксирибонуклеїнова кислота, що складається з послідовності чотирьох нуклеотидів, які прийнято позначати буквами А (аденін), Г (гуанін), Т (тимідин) і Ц (цитозин). Одне з основних правил генетики - правило комплементарності, тобто нуклеотиди сусідніх спіралей ДНК з'єднуються тільки в певному порядку: А з Т, Г з Ц, і ніяк інакше.
У кожного живого створення (бактерія, вірус, риба, звір) - своя ДНК, причому для виявлення конкретного організму достатньо мати лише невелику ділянку цього сховища генетичної інформації. Деякі види мікроорганізмів, наприклад, вірус імунодефіциту людини, зберігають генетичну інформацію в іншій нуклеїнової кислоти - РНК, але і її фрагменти можна знаходити за допомогою ПЛР.
Саме на виявленні цього невеликого, але унікального для кожного окремого організму ділянки і побудований принцип ПЛР. Для кожного збудника створений свій специфічний генетичний детектор, еталонний фрагмент ДНК, який за принципом комплементарності точно виявляє "свій" фрагмент ДНК і запускає реакцію створення величезної кількості його копій.
Один цикл ПЛР триває близько трьох хвилин, кількість копій зростає в геометричній прогресії. Таким чином, за кілька годин кількість фрагментів збільшується в кілька мільярдів разів. Зрозуміло, що тепер визначити, який збудник у даної конкретної інфекції, досить легко.
Переваги
Теорія - це, безумовно, чудово, але що ми маємо на виході? Яку практичну вигоду отримує людина, коли вирушає на пошуки шкідливих мікроорганізмів, озброєний ПЛР?
- Безумовно, одне з головних достоїнств - це універсальність методу. ПЛР дозволяє виявляти будь ДНК і РНК, навіть коли безсилі інші методи. Обладнання, що використовується для ПЛР, стандартно, воно не залежить від того, що саме і де саме ми шукаємо.
- Наступний плюс - висока специфічність. У матеріалі, надісланому на дослідження, визначається унікальна послідовність нуклеотидів, характерна тільки для конкретного збудника. Таким чином, можна говорити, що специфічність методу досягає 100%. Крім того, це дозволяє одночасно, в одному і тому ж матеріалі, проводити пошук декількох збудників без якогось шкоди для якості відповіді.
- Метод ПЛР має високу чутливістю - ми вже говорили про те, що можливо знайти всього один фрагмент генетичного матеріалу збудника.
- Безсумнівна перевага методу - оперативність. Постановка реакції займає кілька годин, таким чином, вся діагностика, від моменту здачі матеріалу на аналіз до отримання результату, відніме всього один день.
- За допомогою ПЛР визначають збудника, а не реакцію на його впровадження з боку організму. Таким чином, з'явилася можливість точно діагностувати захворювання ще в інкубаційному періоді, коли немає жодних клінічних або лабораторних ознак хвороби.
Недоліки
Безумовно, ПЛР не кращий метод, є і свої недоліки. Але вони безпосередньо пов'язані з його достоїнствами і з так званим "людським фактором". ПЛР - дуже високотехнологічний метод, що вимагає дотримання найсуворіших правил оснащення лабораторії. Досить сказати, що в приміщенні повинен бути встановлений фільтр біологічного очищення зі ступенем 99,9%. Це пов'язано з тим, що в повітрі постійно присутній неймовірний коктейль з фрагментів ДНК всіляких живих організмів, і в процесі підготовки до проведення реакції зразок може бути забруднений - можливо "помилкове спрацьовування".
Оцінювати результати ПЛР повинен практичний лікар, який лікує конкретного хворого. Справа в тому, що далеко не завжди позитивну відповідь ПЛР означає наявність захворювання. Наприклад, людина пролікувався від якогось захворювання, але загиблий і вже не небезпечний збудник буде ще деякий час "розбиратися на запчастини" захисною системою організму. Якщо в цей момент зробити ПЛР - результат виявиться позитивним.
Інший варіант - це негативний результат ПЛР при наявності навіть явної клінічної картини. Одна з найбільш можливих причин - матеріал для дослідження було взято "чи не звідти". Зразок повинен брати кваліфікований лікар, суворо дотримуючись інструкції, яку йому дає лабораторія.
Коли потрібно робити?
Коли слід бігти в лабораторію, щоб проаналізувати підсумки вашого літньої відпустки? Фахівці радять робити це в наступних випадках: виділення, свербіж, відчуття печіння в області статевих органів, різко змінився запах від статевих органів, дискомфорт при сечовипусканні, незвичайний характер виділень (колір, кількість, консистенція), випадковий статевий контакт без застосування презерватива.
Безумовно, ПЛР - потужний і ефективний діагностичний інструмент, що дозволяє швидко і точно знайти збудників дуже багатьох інфекцій. Найчастіше його використовують для діагностики саме захворювань, що передаються статевим шляхом. Причому найчастіше клініки й лабораторії вже пропонують своєрідні готові "набори" - 5 інфекцій, 13 інфекцій.
У будь-якому разі не можна обмежуватися тільки одним методом. Найкраще комбінувати різні методи дослідження - крім визначення самого збудника методом ПЛР необхідно оцінювати і імунну відповідь організму, який визначається традиційними вже серологічними методами, наприклад, ІФА.
І пам'ятайте: позитивну відповідь будь-якого, навіть самого сучасного лабораторного дослідження - це привід не для паніки, а для візиту до лікаря.